對於同類或結構類型近似的物質,若采用萃取、簡單的離子交換法都很難分離時,可采用色譜法進行分離。

①薄層色譜(TLC)法

TLC法是把載體均勻地塗布在玻璃板上形成一薄層,將欲分離的樣品點加在薄層上,然後用合適的溶劑展開,以達到分離和鑒定的目的。載體有矽膠和氧化鋁等。薄層色譜不僅適用於少量樣品的分離,也可用於較多樣品純化。薄層色譜在表麵活性劑的分離上有很廣泛的應用。

②紙色譜法

紙色譜是將試樣點在濾紙上,通過溶劑展開而分離。紙色譜法常用的濾紙有進口的Whatman紙,紙色譜的使用範圍與薄層色譜類似。

③柱色譜法

柱色譜是將吸附劑(矽膠和氧化鋁)裝入玻璃柱中,再用用極性不同的溶劑作梯度洗脫,洗脫時一般按溶劑的極性由小到大順序加入,常用的有機溶劑按極性由小到大的順序排列如下: 正己烷<石油醚<環己烷<四氯化碳<苯<甲苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水<乙酸<甲酸。
柱色譜常用於分離各種類型的非離子組分,柱色譜在紡織助劑混合物中分離常被推薦。雖然柱色譜目前已發展為分離效果更佳的高壓液相色譜,但由於其分離量可以隨意選擇,故仍然被經常使用。

④氣相色譜(GC)和高壓液相色譜(HPLC)法

氣相色譜:將樣品裂解成可揮發的小分子,再用氣相色譜直接分離和鑒定這些物質。氣相色譜的分離效率據所有色譜之首,選用合適的固定相和操作條件,能將沸點差別很小的物質分開,但可惜其分離量實在太小,一般作為鑒定的手段使用。高壓液相色譜選用溶劑做流動相,對於揮發性低,熱穩定性差、分子量大的高分子化合物,以及離子型化合物都可以分離。在分析分離時,氣相色譜(GC)和高壓液相色譜(HPLC)法兩者可以互補,但均需標樣,現在有將GC和 HPLC與MS聯用的儀器,改進了分析時需標樣的缺點,但儀器太貴,一般實驗室難以配備。